豚鼠纖溶酶抗復(fù)合物(PAP) ELISA試劑盒

英文：Guinea Pig plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit

規(guī)格：96T/48T

ELISA試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒，用于對液體樣本中的目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量檢測。隨著國家對科研項(xiàng)目的重視，在科研單位和廣大科研類院校也越來越受歡迎。
ELISA試劑盒的基本原理

（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；

（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；

（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。

由于ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而，具有特異性。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一種既敏感又特異的方法。

特點(diǎn)

一、高效、靈敏、特異的抗體;二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

制備方法

1)抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選;2)抗原的制備;3)血清的采集;4)間接ELISA方法的建立;5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證;6)試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證;7)對屠宰場進(jìn)行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。

樣本類型

1、 血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。5、 保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒成分

1.預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2.酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 13.標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 24.EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 15.標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 16.顯色劑: TMB底物液 15mL x 17.終止液: 1N硫酸 12mL x 18.濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1

豚鼠纖溶酶抗復(fù)合物(PAP) ELISA試劑盒 ELISA檢測系統(tǒng)是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中最為廣泛最為靈敏的技術(shù)手段，有著十分重要的作用。操作步驟雖然看起來比較簡單但是實(shí)驗(yàn)過程有很多的操作要點(diǎn)需要掌握，操作步驟中如果稍有不慎，操作不合理的地方，就會造成很多問題從而影響到ELISA試劑盒檢測的準(zhǔn)確性，大大降低試驗(yàn)質(zhì)量。比如說花板，ELISA試劑盒假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低……這就需要我們在實(shí)驗(yàn)過程中多做總結(jié)，逐步完善，還有就是要多多學(xué)習(xí)，分享學(xué)習(xí)心得。下面就大體總結(jié)一下ELISA實(shí)驗(yàn)的常見問題和解決方法，同大家一起分享。

1、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。ELISA試劑盒②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下最終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。人ELISA試劑盒常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%-10%）;還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。但最終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來實(shí)踐。

4、洗滌板：可以說在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈Φ鞍踪|(zhì)的吸附是普遍性的，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差，人為因素很大（當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外），洗的不*或串了孔，對如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。

5、加抗體標(biāo)本（和二抗）:注意該換槍頭時換槍頭。ELISA試劑盒標(biāo)本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費(fèi)，太低則著色淺。

6、顯色:顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。

7、每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現(xiàn)問題也好分析。

兔白細(xì)胞介素15（IL-15）  ELISA試劑盒

兔糖胺聚糖 (GAG)  ELISA試劑盒

兔血管活性腸肽(VIP)  ELISA試劑盒

兔C-反應(yīng)蛋白(CRP)  ELISA試劑盒

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）  ELISA試劑盒

兔前列腺素F2a（PGF2a）  ELISA試劑盒

兔氧化低密度脂蛋白（OxLDL）  ELISA試劑盒

兔水通道蛋白4（AQP4）  ELISA試劑盒

兔白細(xì)胞介素1β（IL-1β）  ELISA試劑盒

兔白細(xì)胞介素35（IL-35）  ELISA試劑盒

兔堿性磷酸酶(ALP)  ELISA試劑盒

兔細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1）  ELISA試劑盒

兔血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢaCD41+CD61)  ELISA試劑盒

兔骨退化特異性標(biāo)志物 CTX-2抗體  ELISA試劑盒

兔白細(xì)胞介素1（IL-1）  ELISA試劑盒

兔金屬蛋白酶組織抑制因子-3 (TIMP-3)  ELISA試劑盒

兔誘導(dǎo)型NO合酶(iNOS）  ELISA試劑盒

兔金屬蛋白酶組織抑制因子-1 (TIMP-1)  ELISA試劑盒

兔胎盤生長因子(PLGF）  ELISA試劑盒

兔組織因子（TF）  ELISA試劑盒

兔增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)  ELISA試劑盒

兔抗凝血酶(TAT)  ELISA試劑盒

兔分泌型免疫球蛋白A(sIgA)  ELISA試劑盒

兔前列腺素E1(PGE1)  ELISA試劑盒

兔前列腺素E2(PGE2)  ELISA試劑盒

兔脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)  ELISA試劑盒

兔白介素17(IL-17)  ELISA試劑盒

兔核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) ELISA試劑盒

兔粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF) ELISA試劑盒

兔血清淀粉樣蛋白A(SAA) ELISA試劑盒

兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP) ELISA試劑盒

兔子α2抗纖溶酶(α2-AP)  ELISA試劑盒

兔子纖溶酶原(Plg)  ELISA試劑盒

兔骨形成蛋白(BMPs)  ELISA試劑盒

兔骨保護(hù)素(OPG)  ELISA試劑盒

兔胰淀素(Amylin)  ELISA試劑盒

兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ) ELISA試劑盒

兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)  ELISA試劑盒

兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)  ELISA試劑盒

兔心肌特異性肌鈣蛋白T ELISA試劑盒

兔溶菌酶(LZM)  ELISA試劑盒

兔子催乳素(PRL) ELISA試劑盒

兔子促黃體激素(LH)  ELISA試劑盒

兔抗腦組織抗體(ABAb)  ELISA試劑盒

兔p53(p53)  ELISA試劑盒

兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)  ELISA試劑盒

兔阿霉素(ADR) ELISA試劑盒

兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A) ELISA試劑盒

兔抑瘤素M(OSM) ELISA試劑盒

兔血管生成素2(ANG-2) ELISA試劑盒

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兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)  ELISA試劑盒

兔6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a) ELISA試劑盒

兔血栓素B2(TXB2) ELISA試劑盒

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兔血纖蛋白原(Fbg) ELISA試劑盒

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兔凝血酶原片段F1+2(F1+2) ELISA試劑盒

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兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR) ELISA試劑盒

兔脂蛋白α(Lp-α)  ELISA試劑盒

兔載脂蛋白E(Apo-E)  ELISA試劑盒

兔載脂蛋白B100(apo-B100)  ELISA試劑盒

兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2) ELISA試劑盒

兔一氧化氮合成酶(NOS)  ELISA試劑盒

兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)  ELISA試劑盒

兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)  ELISA試劑盒

兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA) ELISA試劑盒

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP) ELISA試劑盒

兔基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)  ELISA試劑盒

兔8-異構(gòu)前列腺素(8-epi-PGF2α) ELISA試劑盒

兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4) ELISA試劑盒

兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG) ELISA試劑盒

兔子中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE) ELISA試劑盒

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兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3) ELISA試劑盒

兔子可溶性CD40配體(sCD40L) ELISA試劑盒

兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)  ELISA試劑盒

兔子高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)  ELISA試劑盒

兔子B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2) ELISA試劑盒

兔色素上皮衍生因子(PEDF) ELISA試劑盒

兔抗糖蛋白抗體(GP) ELISA試劑盒

兔抗單核細(xì)胞抗體(AMA) ELISA試劑盒

兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb) ELISA試劑盒

兔抗平滑肌抗體(ASMA)  ELISA試劑盒

兔子白介素9(IL-9)  ELISA試劑盒

兔載脂蛋白A1(apo-A1)  ELISA試劑盒

兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)  ELISA試劑盒

兔纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI) ELISA試劑盒

兔子白介素2(IL-2) ELISA試劑盒

兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140) ELISA試劑盒

兔一氧化氮(NO) ELISA試劑盒

兔補(bǔ)體蛋白3(C3) ELISA試劑盒

兔p物質(zhì)(SP) ELISA試劑盒

兔子層連蛋白/板層素(LN) ELISA試劑盒

兔環(huán)磷酸腺苷(cAMP) ELISA試劑盒

兔血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF) ELISA試劑盒

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)  ELISA試劑盒

兔骨橋素(OPN) ELISA試劑盒

兔子脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2) ELISA試劑盒

兔血清總補(bǔ)體(CH50) ELISA試劑盒

兔乙酰膽堿受體抗體(AChRab) ELISA試劑盒

兔誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS) ELISA試劑盒

兔熱休克蛋白90(HSP-90) ELISA試劑盒

兔熱休克蛋白70(HSP-70) ELISA試劑盒

兔熱休克蛋白40(HSP-40) ELISA試劑盒

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兔組織因子途徑抑制物(TFPI) ELISA試劑盒

兔乙酰膽堿(ACh) ELISA試劑盒

兔去甲腎上腺素(NA) ELISA試劑盒

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兔子視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4) ELISA試劑盒

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