無(wú)外泌體血清|SBI說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品名稱：去除無(wú)外泌體血清

貨號(hào)：EXO-FBS-50A-1

品牌：SBI

規(guī)格：50ml

當(dāng)外泌體在1980年被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、腫瘤侵襲等方方面面。有研究表明腫瘤來(lái)源的外泌體參與到腫瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)與侵襲。

外泌體大家應(yīng)該都很熟悉。1983年，在綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中第一次發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)在生物學(xué)研究領(lǐng)域炙手可熱的“小網(wǎng)紅"——一種特殊囊泡結(jié)構(gòu)，并與1987年正式被命名為“exosome"。

外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。為細(xì)胞間通訊的重要媒介，它像一個(gè)信使，為細(xì)胞與胞外環(huán)境傳遞信息，保障機(jī)體的正常工作。

越來(lái)越多的科研人員投入到外泌體的研究中，根據(jù)PubMed統(tǒng)計(jì)顯示，最近幾年，外泌體研究呈爆炸增長(zhǎng)。

外泌體的研究離不開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)。以腫瘤相關(guān)外泌體研究為例，目前，收集腫瘤細(xì)胞外泌體主要有兩種方法：

方法一

使用正常培液養(yǎng)細(xì)胞再換無(wú)血清培液收外泌體。

方法二

直接使用exosome-free FBS配制培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細(xì)胞收外泌體。

首先，就是基本的離心條件了，目前超離比較好的就是貝克曼或者日立的了，這兩家超離在行業(yè)內(nèi)算是翹楚了。其次就是離心參數(shù)了：120000 g，4℃，離心14h，離心結(jié)果如圖：

 

1：離心后，血清外泌體會(huì)富集在管底和管壁；

2：吸取血清時(shí)，只吸取澄清部分的血清，并且遠(yuǎn)離上圖中標(biāo)記的區(qū)域；

3：吸取70-80%的澄清的血清；（注意：動(dòng)作慢，動(dòng)作輕）

4：其余的渾濁血清留作正常細(xì)胞的的營(yíng)養(yǎng)物添加使用，避免浪費(fèi)。

5：如果覺(jué)得純度不夠，再把離心后收集的血清做二次超速離心。

6：針對(duì)超速離心后的血清，必須進(jìn)行粒徑檢測(cè)（離心前樣品和離心后樣品），該數(shù)據(jù)可以放到文章補(bǔ)充材料中，用來(lái)證明無(wú)血清外泌體制備成功。

WINSERA® Fetal Bovine Serum 胎牛血清目錄如下：

 

人膽囊上皮細(xì)胞永生化

人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP

人前庭鞘膜瘤細(xì)胞永生化

人胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞永生化

人胰腺癌細(xì)胞永生化

人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化

人風(fēng)濕性關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞永生化

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化

人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化

人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞永生化

人腸癌細(xì)胞永生化

人頸靜脈球瘤細(xì)胞永生化

人副神經(jīng)節(jié)瘤細(xì)胞永生化

人腸息肉上皮細(xì)胞永生化

人原代聽(tīng)神經(jīng)瘤細(xì)胞永生化

人原代髓核細(xì)胞永生化

人原代神經(jīng)鞘膜瘤細(xì)胞永生化

人胰腺腫瘤成纖維細(xì)胞永生化

人眼瞼皮脂腺癌細(xì)胞永生化

人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞永生化

人睪丸支持細(xì)胞永生化

人骨骼肌細(xì)胞永生化

人卵巢癌細(xì)胞永生化

人真皮成纖維細(xì)胞永生化

人原代甲狀旁腺主細(xì)胞永生化

人原代乳腺上皮細(xì)胞永生化

人原代乳腺癌成纖維細(xì)胞永生化

人原代軟骨細(xì)胞永生化

人臍靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞+GFP

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

小鼠肺成纖維細(xì)胞永生化

小鼠附睪脂肪干細(xì)胞永生化

小鼠腎小球系膜細(xì)胞永生化

小鼠胰腺星狀細(xì)胞永生化

小鼠脂肪干細(xì)胞永生化

麝香鼠原代乳腺上皮細(xì)胞永生化

小鼠骨髓巨噬細(xì)胞永生化

小鼠角膜上皮細(xì)胞永生化

小鼠肝星狀細(xì)胞永生化

大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞永生化

大鼠脂肪干細(xì)胞+RFP

雞胚成纖維細(xì)胞永生化

雞氣管黏膜上皮細(xì)胞永生化

鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

鴨胚成纖維細(xì)胞永生化

鴨胚肝間質(zhì)細(xì)胞永生化

羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞永生化

湖羊瘤胃上皮細(xì)胞永生化

山羊乳腺上皮細(xì)胞永生化

豬脂肪干細(xì)胞永生化

豬扁桃體上皮細(xì)胞永生化

豬肝星狀細(xì)胞永生化

豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞永生化

豬子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化

豬鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化

豬外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）永生化

豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化

豬小腸上皮細(xì)胞永生化

雪貂鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化

兔子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化

兔肝臟間質(zhì)細(xì)胞永生化

無(wú)外泌體血清|SBI說(shuō)明書(shū)胎牛血清（FBS）已在真核細(xì)胞培養(yǎng)中使用了幾十年了。然而，很少有人關(guān)注FBS的RNA對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生什么樣的生物學(xué)效應(yīng)。來(lái)自哈佛醫(yī)學(xué)院的研究人員用RNA測(cè)序，證明了FBS含有蛋白質(zhì)編碼和調(diào)控的多種RNA，包括mRNA、miRNA、rRNA和snoRNA等。它們中的大多數(shù)（>70％）仍然存在于細(xì)胞外囊泡（EV）和細(xì)胞間通訊研究中常使用的長(zhǎng)時(shí)間超速離心得到的無(wú)囊泡FBS（vesicle-depleted FBS, vdFBS）中。FBS相關(guān)的RNA會(huì)在分離細(xì)胞外膜泡RNA（exRNA）時(shí)一同被分離出來(lái)，這會(huì)對(duì)下游RNA分析造成干擾。許多進(jìn)化上保守的FBS源的RNA種類會(huì)被錯(cuò)誤地認(rèn)為是人或小鼠細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄本。值得注意的是，在FBS中含量豐富的一些miRNAs，如miR-122、miR-451A和miR-1246，先前已被報(bào)道為在培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外膜泡中富含的miRNAs，這可能是胎牛血清中miRNAs造成的假象。對(duì)公開(kāi)可用的exRNA數(shù)據(jù)庫(kù)的分析支持FBS污染的概念。此外，FBS轉(zhuǎn)錄本可被培養(yǎng)的細(xì)胞吸收，并影響高度敏感的基因表達(dá)譜技術(shù)的結(jié)果。因此，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過(guò)程中采取減少FBS源RNA干擾的預(yù)防措施是非常有必要的。

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