動物血清的定義:
血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后,分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。血清的主要作用是提供基本營養(yǎng)物質,包括激素、維生素、轉運蛋白、微量元素、擴散因子和生長因子等細胞增殖和維持的必需成分,促進細胞生長。
動物血清的分類:
1、按來源動物分
常見的血清供體動物,主要有牛、馬、豬、兔、雞等。
2、按照牛的年齡分
市場上常見的牛血清,根據采血時間不同和血清采制方法分為:又可以分為胎牛、新生牛、小牛血清和成年牛血清:胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS):5-8月未出生胎牛,人工引產胎牛心臟穿刺取血;新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡稱NBCS):出生14小時內未進食的新生牛,通常采用頸動脈采集血液分離得到的血清;小牛血清(Calf Serum):出生后1-12月齡小牛動脈采血分離血清;成年牛血清(Adult Bovine Serum,簡稱ABS):一歲以上成年牛,屠宰時收集全血后分離得到血清。
以上取血牛齡的差異主要是受當地國家畜牧業(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響,因為牛血多為畜牧業(yè)副產業(yè),并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。不同牛齡血清所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組分與比例不同。常規(guī)來說,年齡越小的牛血清,細胞培養(yǎng)效果越好。其中胎牛由于還未接觸外界,血液中所含抗體、補體等對細胞生長有害的成分最少,血清的質量高。根據血清質量從優(yōu)到次排序依次為,胎牛>新生牛>小牛>成年牛。所以目前多數科研人員選擇胎牛血清進行細胞培養(yǎng)。
3、按照采集地點分
根據血源采集地不同,大致又可以分為澳洲、北美、南美及中國四大類。
從血源質量、加工工藝、質控上區(qū)分,從優(yōu)到次排序依次是澳洲>北美>南美>國產。特別是生產過程中,澳洲和北美大多采用靜置分層工藝,對紅細胞破壞小,血清中的血紅蛋白和膽紅素較少,顏色呈透明的淡黃色;而南美則大多采用離心收集工藝,紅細胞破壞較多,血清中血紅蛋白和膽紅素較多,顏色偏紅。
根據不同品質分:
區(qū)分胎牛血清很重要的一點就是血清的內毒素含量,內毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優(yōu)級胎牛血清;當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;目前,由于同一廠家,不同批次的血清,內毒素數值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級別。但使用者仍可通過檢測報告進行甄別。
根據不同處理分:
透析胎牛血清:透析過濾去除10kD以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對細胞產生干擾。適合脈沖示蹤實驗(例如同位素標記特定小分子加入到培養(yǎng)體系中,以研究細胞代謝),也適合轉染CHO后的篩選等應用。去外泌體血清:通過超速離心法去除絕大部分外泌體的血清,適用于外泌體相關細胞實驗研究。超低lgG的血清:使用親和層析等工藝,去除IgG,使其水平低于標準值,適用于抗體、病毒和病毒反應以及細胞表面抗原表位相關研究?;钚蕴?葡聚糖處理的血清:可降低血清中類固醇激素的濃度,例如雌二醇、孕酮、皮質醇、睪酮、T3 和 T4。適用于相關激素研究的實驗。
其他動物源血清:
馬血清:一般分為兩種:第一種馬血清含有的大分子蛋白比較多,適用于蛋白封閉;第二種馬血清為細胞培養(yǎng)級別。經過多次過濾,去除大多數大分子蛋白,但保留了血清中促細胞生長的活性因子,適用于細胞培養(yǎng),例如神經細胞培養(yǎng)時,培養(yǎng)基中需要添加馬血清。豬血清:常用于豬肺炎支原體疫苗的生產。在對細胞和活疫苗進行支原體檢驗中,《獸藥典》明確推薦豬血清作為支原體檢驗用液體培養(yǎng)基的組成成分。兔血清:兔血清通常從六個月或更小的動物身上收集,可用于免疫細胞化學和免疫組織化學中的封閉血清。羊血清:多用做封閉液,也有一些研究人員發(fā)現,優(yōu)質的羊血清可用于某些細胞的培養(yǎng)。雞血清:從屠宰供人類食用的健康雞中收集的。有研究用于血清維生素 B12 的放射性同位素稀釋測定。
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