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WINSERA胎牛血清為什么要熱滅活血清?有必要做熱滅活嗎?
加熱可以滅活血清中的補(bǔ)體系統(tǒng),使補(bǔ)體去活化。通常未滅活的補(bǔ)體能夠刺激平滑肌收縮、肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放、激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,同時(shí)還能夠參與溶解細(xì)胞的過(guò)程。
諸多研究表明大多數(shù)細(xì)胞的培養(yǎng)無(wú)須進(jìn)行血清的熱滅活;而在免疫學(xué)研究和ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中,推薦使用熱滅活血清。實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)正確熱滅活處理的血清,對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)或*沒(méi)有促進(jìn)作用,而通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。并且熱處理過(guò)的血清,沉淀物明顯增多,倒置顯微鏡下觀察呈“小黑點(diǎn)",往往會(huì)使研究者誤以為是血清受到了污染,而把血清放于37℃中,沉淀物又會(huì)更增多,有會(huì)使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂增殖。因此我們建議若非必須,可以不進(jìn)行熱處理,既節(jié)省時(shí)間又確保質(zhì)量。
熱滅活方法?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng) ES 細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56 ℃,30 分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。
2. 在血清解凍時(shí),將一個(gè)容器裝入適量的水,用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過(guò)程中檢測(cè)瓶?jī)?nèi)水的溫度。容器大小、質(zhì)地和裝水的量最好與裝血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清*解凍時(shí),將含有血清的瓶子放在預(yù)熱的 56 ℃水浴里,不要將含有血清的瓶子讓水淹沒(méi)或接近瓶子的蓋子,以免導(dǎo)致污染。
4. 在開(kāi)始加熱處理時(shí),要及時(shí)使用溫度計(jì)測(cè)定模擬瓶?jī)?nèi)水的溫度。
5. 在預(yù)熱期間,每隔 3-5 分鐘要適當(dāng)搖晃含有血清和水的瓶子,確保瓶?jī)?nèi)液體均勻加熱。6. 一旦模擬瓶?jī)?nèi)的水溫達(dá)到 55.8± 0.5 ℃時(shí),開(kāi)始計(jì)時(shí),并在此溫度范圍內(nèi)熱處理 30 分鐘,然后立即放在冰上冷卻。
為防止在熱處理過(guò)程中由蛋白質(zhì)變性而導(dǎo)致的渾濁和沉淀現(xiàn)象,熱處理時(shí)應(yīng)注意下列事項(xiàng):
不要用高于 25 ℃ 以上的溫度加快解凍速度。
2. 在熱處理之前,要使血清*融解。
3. 不要使熱處理的溫度高于 56.3 ℃
4. 熱處理時(shí)間不要長(zhǎng)于 30 分鐘。
5. 在加熱過(guò)程中一定要定時(shí)搖動(dòng)血清。