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?胎牛血清知多少？

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白原后的混合物。主要成分包括蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類和維生素、多肽（如生長因子、胰島素、促生長激素）等。血清是細(xì)胞培養(yǎng)過程重要的營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)也對(duì)細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。

?胎牛血清重復(fù)凍存和解凍

經(jīng)過5次解凍/凍存循環(huán)的血清在細(xì)胞生長性能、生化分析數(shù)據(jù)和濁度方面沒有明顯的變化，我們認(rèn)為血清經(jīng)多次解凍/凍存循環(huán)（可達(dá)5次）之后，不會(huì)影響細(xì)胞的生長。雖然測定數(shù)據(jù)顯示，經(jīng)過多達(dá)5次解凍/凍存血清性能并未出現(xiàn)明顯的下降，但反復(fù)凍融會(huì)造成血清的沉淀增多，給后續(xù)處理帶來麻煩，我們建議血清的解凍/凍存次數(shù)越少越好。

?胎牛血清儲(chǔ)存和使用方法

我們建議血清儲(chǔ)存在-10℃或更低溫度條件下。產(chǎn)品效期是基于-10℃儲(chǔ)存條件的穩(wěn)定性研究。然而，研究表明儲(chǔ)存在-80℃下的血清，在性能方面也沒有任何變化，但我們建議不要在-80℃條件下儲(chǔ)存，解凍時(shí)巨大的溫差會(huì)導(dǎo)致更多沉淀的產(chǎn)生。一旦解凍，血清可在2-8℃條件下儲(chǔ)存6周，且維持產(chǎn)品質(zhì)量。如果解凍之后的血清儲(chǔ)存時(shí)間大于6周，我們建議分裝成合適的體積并重新凍存。

?胎牛血清解凍方法

首先將凍存的血清移到2-8℃的冰箱中，過夜；于37℃水浴，間歇性搖晃混勻底部的溶解物。解凍之后的血清不要長時(shí)間放置在37℃下。若血清沒有混勻且放置于高于40℃的水浴中，底部的蛋白會(huì)變性形成沉淀。不推薦高溫解凍血清。在解凍或長時(shí)間儲(chǔ)存之后，血清中會(huì)出現(xiàn)渾濁物和絮狀物。在解凍過程中，需不斷的搖晃混合以阻止形成梯度及沉淀。由于血清的不同成分解凍速率不同，當(dāng)解凍時(shí)，若無混合操作，會(huì)形成一個(gè)梯度。如果血清一直保持此梯度狀態(tài)，隨后會(huì)形成沉淀。

?后再給大家?guī)c(diǎn)福利，認(rèn)清血清沉淀的“真面目”：

1、用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清及其它血清產(chǎn)品存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也會(huì)含有纖維蛋白和磷酸鈣。雖然沉淀可引起初始問題，但在細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用方面，沉淀不會(huì)對(duì)血清的性能產(chǎn)生影響。

2、纖維蛋白

清中的纖維蛋白通常為肉眼可見的較大物質(zhì)（可達(dá)1-2 mm）。由于血清在低溫條件下收集并迅速加工處理，導(dǎo)致一些纖維蛋白原（纖維蛋白的前體）仍存在于溶液中。在過濾之后，血清中的纖維蛋白凝固并沉淀。

3、磷酸鈣

磷酸鈣也是血清產(chǎn)品中常見的沉淀，通常表現(xiàn)為云狀物。倒置顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)許多小黑點(diǎn)。由于布朗運(yùn)動(dòng)，這些黑點(diǎn)可自由移動(dòng)。

磷酸鈣沉淀物通常被誤認(rèn)為微生物污染。在37℃孵育之后，血清中的磷酸鈣沉淀物會(huì)增加。因此，我們建議不要直接用37℃孵育的血清測試無菌性。將1 mL的待測血清直接傾倒于細(xì)菌瓊脂平板（例如胰酪蛋白胨大豆瓊脂），37℃培養(yǎng)之后觀察菌落的生長情況。油鏡（放大1000倍）下觀察革蘭氏染色，判斷是否污染。

?細(xì)胞生長

測試及經(jīng)驗(yàn)表明，沉淀不會(huì)改變血清作為培養(yǎng)基添加物的性能。這已經(jīng)被客戶及其它廠家證實(shí)。

過濾

如果血清中含有大量的沉淀，我們不建議進(jìn)行過濾血清。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管中，以400g稍微離心，上清液可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。

沉淀物的控制

血清中的沉淀很難預(yù)測和阻止，沉淀不會(huì)改變血清的性能，但在正確的儲(chǔ)存和使用操作會(huì)降低血清中沉淀的析出。

如下條件會(huì)增加沉淀：

  •血清熱滅活；

  •37℃孵育；

  •重復(fù)凍存與解凍操作；

  •解凍工程中為未混合；

  •γ-輻照；